细菌转化是分子生物学中最常见的技术之一。该方法将外源DNA（例如质粒，基因缺失盒等）转移到宿主细胞中。一旦在细胞内，则可以将DNA掺入基因组中，复制，用于产生蛋白质，以及更多。然而，转化可能是一种低效的过程，需要方法技巧以将DNA移动过去的细菌膜和细胞壁，并使细菌“能力”进行DNA吸收。

什么是能力？

许多细菌种类可以自然吸收来自环境的DNA。然而，最常见的遗传转化的实验室细菌，大肠杆菌， 不是。

克服缺乏自然能力，大肠杆菌可以通过许多程序治疗，以使其能够占用DNA。通常，研究人员使用化学（和热休克）或电穿孔装置转变，但存在其他方法。使能态细胞的过程将孔引入细胞膜中，使它们更容易吸收细胞外DNA。一旦这些能力方法完成，就会大肠杆菌细胞已准备好进行DNA转化。

什么是转型效率？

转化效率通常用于描述能力的细胞如何占用DNA。该值被描述为通过将1μg质粒DNA转化为给定量的富集细胞产生的菌落形成单元（CFU）的数量。例如，理想的效率将是10^8.CFU /μgDNA。

转化效率受到各种因素的影响，包括靶细胞的基因型，质粒大小，超硅酸型与松弛DNA，收集时细胞的生长阶段和转化方法。鉴于各种潜在的混杂因素，必须特别注意确保成功的转型实验。

使能称情的细胞

最典型的是，使用具有质粒DNA的分子克隆工作流量，蛋白质表达和任何各种应用的竞争力细胞。然而，制备大肠杆菌态细胞可能是乏味的，需要极其纯净的水，指定高压灭菌的玻璃器皿和高级试剂，甚至是专用设备（电穿孔器），这取决于转化方法。有许多协议可提供详细信息，该过程和缓冲区所需的流程细胞。甚至可以使用预先制作的缓冲区提供套件，以加快此过程。鉴于这些挑战，下面的列表可以帮助您在制作竞争力的细胞时对问题进行调整。

制作化学态度的细胞：

1. 让他们冷！
   
   由于细胞保持感冒，使能态细胞的过程是挑战性的。这是至关重要的，因为细胞是如此敏感和脆弱，而他们是称职的。保持温度低有助于在加工过程中避免细胞死亡。
   
   如果可能的话，这意味着使用冷室，并在0-4°C下进行离心。预冷的微量离心管和齿条也应在使用前使用并保持在干冰上。这样做允许细胞更快地冻结，特别是在调味细胞时。
   
   在培养过程中，保持细胞感到甚至很重要。较低的温度生长（18-33°C）增加转化效率。由于此，我们建议使用Zymobroth.，即使在较低的温度下也可以促进有效的增长。
   
   
   
2. 准备冰箱空间
   
   绩效细胞需要储存在-80°C。使细胞的流程使得它们非常脆弱 - 可能破裂和死亡。这意味着在-20°C存储可以显着地妨碍变换效率。在-20°C的储存仅24小时后，细胞可能会损失高达90％的变换效率。
   
   
   
3. 在开始之前准备试剂和实验室软件
   
   使能称情的细胞可以是一种漫长而繁琐的过程，具有几种冗长的孵化。该过程需要使用无菌生长介质，玻璃器皿和加工试剂。这需要在开始过程之前准备所有试剂和实验室软件。

获得能力细胞的最简单方法

使能量细胞使用市售菌株的替代方案。这消除了与该耗时过程相关的许多麻烦，并确保最佳的变换效率，因为它已经被测量和验证。快速和高效转型的最佳选择是混合和走！胜任的细胞。它们具有很高的转换效率为10^9.每μg质粒DNA的转化体并绕过常规的热休克过程，以在20秒内进行转化（用于氨苄青霉素抵抗基质粒）。

绩效细胞是实验室内最常用的试剂之一，并且具有右细胞对于任何成功转化至关重要。

无论您是选择购买或制作能力的细胞，Zymo Research的技术支持团队都可以通过此过程帮助您提供帮助。

2019年6月10日