土豆、面包、米饭、意大利面和其他淀粉类食物是世界上最舒服的食物，因为它们让我们想起童年的食物和与家人在一起的时光，同时为我们提供了一种简单的能量来源。这些富含淀粉的植物是全世界现代饮食的主要成分，人们对这些作物的基因操纵有很大的兴趣。为了研究这一点，不断发展的食品科学领域正在不断发展，并结合分子技术来研究粮食作物的基因组和转录组，以了解如何增加抗逆性并普遍提高产量。然而，从淀粉类食物中提取核酸是出了名的困难，需要优化方法来消除下游分析方法的抑制剂，如qPCR、RT-qPCR和Next-Gen测序。

复杂的方法

幸运的是，科学家们已经提出了许多分离核酸和多糖的方法，但其中许多方法相当复杂。从历史上看，当研究淀粉样品时，研究人员使用含有高盐和西曲溴铵(CTAB)的缓冲液将核酸从淀粉中分离出来。CTAB是一种表面活性剂，其优点是结合多糖，从而将其从溶液中去除，并与核酸共纯化。通常，基于ctab的程序然后与进一步的有机提取方法配对，例如用于DNA的苯酚:氯仿:异戊醇或TRIzol^®RNA。

下游提取方法

虽然有效，但下游提取方法可能会很长，如果不仔细控制和优化，会导致样品损失。幸运的是，RNA纯化使用TRIzol^®,Direct-zol RNA试剂盒收集解决了这些问题。经CTAB处理后，可直接从TRIzol中提取样品^®无相分离的试剂。得到的无偏置RNA质量高，可用于下游应用。

以下协议已被我们的客户成功使用。

从富含多糖和多酚的样品中分离RNA的步骤:

1. 制备萃取缓冲液:2% CTAB, 2% PVP40, 25mM EDTA, 100mM Tris, pH 8, 2M NaCl, 0.5 g/L亚精胺。然后加入3% (v/v) β-巯基乙醇(2-巯基乙醇，BME)，然后进行下面的提取程序。
2. 对于每个样品，在2ml Eppendorf管中以65°C在水浴中预热1.2 mL提取缓冲液。
3. 用研钵和研杵将250毫克样品在液氮中均质，并将粉末转移到预热的提取缓冲液中。
4. 立即旋涡1分钟，然后放回水浴。将样品放在水浴中至少30分钟，每5分钟漩涡一次。
5. 以最大速度(16000 x g)离心10分钟，将上清液转移到新的2 mL微量离心管中。
6. 加入等量的氯仿:异戊醇(24:1)，旋涡30秒，4°C下以最大速度离心15分钟。
7. 移液，不破坏白色间相，并转移到一个新的2毫升微量离心管。
8. 重复氯仿:异戊醇萃取(步骤5和6)。
9. 向水相中加入等量的乙醇(95-100%)，混合并加载到Zymo-Spin柱上。继续阅读Direct-zol RNA试剂盒协议(第4页，步骤3)或RNA清洗和浓缩器协议(第3页，步骤4)。所有步骤都在室温下进行。

对于用其他方法提取的RNA，仍被多糖和其他多酚类物质污染一步PCR抑制剂去除试剂盒可用于去除抑制剂。该试剂盒简单，一步去除PCR抑制剂，如多酚类，腐殖酸/富里酸，单宁，黑色素等。作为基于ctab的方案的替代品，RNA提取可以结合Direct-zol RNA试剂盒，然后使用OneStep PCR抑制剂去除试剂盒进行处理。

虽然具有挑战性，但实施上述步骤将增加加工淀粉类食物的RNA提取的成功率。如需进一步澄清或支持，请联系Zymo Research技术支持团队(tech@zymoresearch.com）.

2019年7月2日