建立更好的重组抗体工厂
几十年来，科学家们一直在使用分子生物学这一久经考验的中坚力量，大肠杆菌，用于重组蛋白表达。虽然这些细菌适应性极强，培养成本低廉，并且能够形成合成各种分子的微型工厂，但它们的使用存在一些问题。
主要的缺陷
分子生物学研究通常涉及纯化细菌中产生的重组分子(如质粒、蛋白质等)，以测试它们对靶细胞(通常是哺乳动物细胞系)的体外作用。然而，从细菌中获取分子有一些缺点，其中最突出的是内毒素。内毒素(脂多糖，LPS)是在革兰氏阴性细菌外膜中发现的分子，可激活先天免疫细胞，诱导细胞应激，并在哺乳动物中引起热原效应。如果内毒素不被消除，它们会使细胞培养实验复杂化在活的有机体内通过引入与从细菌制备的分子(如质粒、蛋白质等)的影响无关的实验变异进行研究。
另一个主要缺陷是细菌细胞缺乏真核生物中发现的许多天然蛋白质修饰系统。因此，在细菌中表达的人类基因来源的重组蛋白将产生可能缺乏正常功能所需的翻译后修饰的蛋白质。
随着高产瞬时哺乳动物表达系统的发展，在哺乳动物细胞中生产重组蛋白已成为学术实验室具有成本效益的选择。在人类细胞培养中表达重组蛋白，而不是大肠杆菌，有几个主要的优势。首先，人类细胞可以产生经过适当修饰的抗体，而不是细菌衍生的未经修饰的变体。第二，在收集抗体时，内毒素不会被收集。最后，培养的细胞可以有效地产生更大的重组抗体。综上所述，这些优点促使研究人员重新考虑用于生产重组哺乳动物蛋白的细胞类型。
新优势
最近的一篇论文1发表在《自然议定书》上的文章提出了一种利用细胞培养生产重组人抗体的有效方法。为了实现这一目标，巴斯克斯-隆巴迪和同事们使用了ZymoPURE质粒纯化用阳离子脂质试剂转染HEK293细胞，制备无内毒素重组抗体哺乳动物表达载体。短暂表达后，收获重组抗体并对其进行表征。这种方法极大地简化了用于哺乳动物系统的高质量重组抗体的生产，使其成为在学术环境中生成多种重组抗体的理想选择。
重新评估和改进核心程序，如抗体生产，是一个令人兴奋和不断增长的研究领域，为改进基本的分子和生化技术提供了很大的希望。随着基于细胞培养的蛋白质生产需求的增加，未来将依赖于结合转染准备质粒纯化的复杂方法。
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引用:
1.巴斯克斯-隆巴迪，R.， Nevoltris, D.， Luthra, A.， Schofield, P.， Zimmermann, C.， Christ, D. 2018。人抗体在哺乳动物细胞中的瞬时表达。自然通讯13(1):99-117。
