学习针对挑战样本类型的最佳提取方法

RNA隔离的挑战

RNA隔离是一个具有挑战性的程序。与高度稳定的DNA不同，RNA非常不稳定，如果没有立即抑制其活性，则RNase酶会很快消化。传统的RNA隔离协议也很乏味，耗时且不可计入。由于RNA隔离对于许多科学企业至关重要，因此研究人员对协议和试剂进行了优化，以加快和简化过程。

RNA隔离方案中的一种流行试剂是Trizol^®。由单相溶液中的苯酚和鸟嘌呤硫氰酸苯胺组成^®（或TRI试剂^®）是一种细胞裂解和RNase抑制溶液，用于从生物样品中同时分离RNA，DNA和蛋白质。TRI试剂的组件^®促进对RNase活性的立即有效抑制，并分离从人类，动物，植物，酵母，细菌和病毒样品中分离出RNA，并在所有量的组织或培养细胞上保持一致的性能。

Trizol^®用于从一系列样品中隔离RNA

Trizol^®专门配制以将总RNA与现代研究实验室中的任何样本类型分离，无论是在学术界还是工业中：细胞，难以裂解或固体组织以及传染性生物学样品。

细胞

Trizol^®允许从细胞中有效分离RNA，因为它迅速分解了细胞结构并使样品中的RNase失活，从而保护RNA免受降解。

难以散热的样品或固体组织

Trizol的化学构成^®还借助于机械匀浆和/或蛋白酶K处理，促进了从难以散热的细胞和组织样品中释放RNA。

传染性生物样品

Trizol^®使血浆，血清，粪便，血液和其他生物样品类型中的病原体失活，从而消除了研究人员的感染风险并简化RNA提取。

用Trizol提取有效RNA的技巧^®

用Trizol提取RNA^®将苯酚和鸟胺硫氰酸酯结合在单相溶液中，促进立即有效抑制RNase活性。但是，在制备生物样品进行RNA隔离时，应考虑到最佳结果的某些考虑。以下是一些样品制备技巧，可确保从细胞，难以散热/固体组织和传染性生物样品中提取有效的RNA：

细胞

由于其细胞结构，哺乳动物细胞最容易在Trizol中裂解^®，通常不需要其他化学裂解或机械均质化。为了最大化RNA隔离效率，在制备Trizol中的细胞时遵循以下效率^®：

• 添加1毫升Trizol^®到5-10 x 10⁶新鲜的，沉淀的哺乳动物细胞。移液管上下，直到细胞完全裂解和同质。
• 提示1：如果裂解物保持阴云密布，不透明和/或粘性，请增加Trizol的体积^®直到清除。
• 提示2：用Trizol裂解后^®，以最大速度离心1-2分钟，然后在加工前将上清液转移到新管中。在旧管的底部留下至少50μl，以避免转移颗粒的一部分。

难以散热/固体组织和传染性生物样品

固体组织，包括心脏，肺，肝脏，肌肉和软骨，比细胞更难裂解。另外，革兰氏阳性细菌和酵母细胞（例如：芽孢杆菌，李斯特菌，糖疗）也被认为是由于其细胞壁中的多糖而难以散热。

传染性生物样品，例如血浆，血清，粪便和全血是复杂的，高度蛋白质的样品，具有易于且易于散热的组件的混合物，因此应像难以散热的样品一样处理。为了最大化RNA隔离效率，请在制备trizol中固定样品，固体组织和感染性生物样品时遵守以下内容^®：

• 提示1：与细胞不同，这些样品类型需要额外的化学裂解和/或机械均质化。
  • 我们建议机械均质化作为裂解这些样品的最佳方法。对于高速均质化（例如，伯丁蛋白的预素），添加1 ml trizol^®到新鲜的组织样品（10％w/v），并以最大速度拍打30-60秒。对于低速均质化（例如，破坏者精灵），以最大速度跳动5-10分钟。确切的时间依赖样本类型。
  • 也可以在有或没有机械均质的情况下进行蛋白酶K处理的化学裂解。如果进行机械均质化，请在蛋白酶K中处理样品30分钟。如果没有，将蛋白酶K治疗时间增加到2-5小时。
• 提示2：均质化和/或蛋白酶K处理后，在纯化之前将任何碎屑离心，然后将上清液转移到新管中。
• 提示3：如果上清液/裂解物仍然多云，不透明和/或粘性，请增加Trizol的体积^®直到清除。

用直接Zol RNA套件在7分钟内从Trizol提取RNA

传统的Trizol^®RNA提取是一种精致的，耗时的协议。一旦细胞裂解，则必须通过添加溴氯丙烷或氯仿并离心样品来分离匀浆。离心后，可见三个阶段：水相（RNA），有机相（DNA）和相间（蛋白质）。

通过添加异丙醇，用乙醇洗涤并溶解最终的RNA颗粒，从水相沉淀了RNA。这个过程的每个步骤都是乏味且耗时的，整个过程需要一个多小时，并且必须谨慎执行。RNA的产量和纯度通常由于细胞裂解不完全而受到损害，苯酚相对水相的污染或不完全溶解的最终RNA颗粒。

Direct-Zol RNA套件Zymo Research旨在与Trizol合作^®，Tri试剂^®，或基于类似的酸 - 瓜氨酸基因试剂，仅在七分钟内就可以从任何样品中获得总RNA提取，包括小/miRNA。使用Direct-Zol RNA试剂盒，您将获得一致的结果，与常规RNA隔离方法相比，RNA产量更高（多达四倍），并且更快的处理时间。无需氯仿或相分离，也没有沉淀步骤，消除了水相污染和不完全溶解的RNA颗粒。

要将RNA与Direct-Zol RNA试剂盒分离，只需在Trizol中添加样品^®直接到Zymo-Spin柱，然后结合，洗涤并洗脱RNA。所得无DNA的RNA已准备好用于任何下游应用，包括下一代测序（NGS），RT/QPCR，Northern blots和其他需要纯RNA的方案。

直接ZOL方法也可以与Direct-Zol-96 Magbead RNA套件，它与任何机器人样品处理器（例如汉密尔顿，翠鸟和泰肯）兼容 - 进行高通量，快速提取任何研究实验室可访问的高质量RNA。

快速，有效的RNA提取的经验

RNA提取不一定是您科学方案中令人恐惧的一部分。Direct-Zol RNA试剂盒使RNA从任何样品类型（包括难以裂解/固体组织样品）中隔离。由于其无与伦比的速度和能够分离出各种细胞和组织类型的纯RNA的能力，因此直接-Zol RNA试剂盒是从TRIZOL中的样品中提取RNA的最佳溶液^®。如果您想亲自体验快速，可扩展的RNA提取的力量，请访问我们的网站要了解有关直接Zol RNA套件的更多信息请求您的免费样品。

2022年4月28日