如何从拭子和唾液样品中提取RNA

有效RNA提取的最佳方法

自2020年初开始大流行以来，Covid-19的测试一直处于每个人的最前沿。但是，在Covid-19测试中进行了什么或任何呼吸道病毒测试是什么呢？哪些设备用于样品收集？德赢体育平台游戏平台RNA提取的步骤是什么？测试解决方案如何进化以满足大流行的不断变化的需求？

COVID-19通常测试了哪些样品类型？

COVID-19测试始于收集样品。由于SARS-COV-2是一种呼吸道病毒，因此该样品通常在上呼吸系统下方收集。上呼吸道棚的感染细胞病毒RNA，然后可以快速通过逆转录酶聚合酶链反应（RT-PCR）检测到或通过遗传测序获得更特异性。

由于其高灵敏度，从喉咙上部或下部收集的拭子样品（分别为鼻咽或口咽）被视为金标准。^[1]但是，这些拭子样品必须由训练有素的医疗保健专业人员（PPE）收集。这一要求导致整个Covid-19的大流行，瓶颈质量测试工作，导致PPE短缺。

唾液样品已成为病毒诊断的拭子样品的替代方法。唾液样品不仅易于收集 - 它们可以在一个人的舒适度中自我收集，而且它们的敏感性与拭子样品的敏感性相当。这些功能使唾液样品成为拭子样品的吸引人补充。

如何从唾液和拭子样品中提取RNA

样品收集后的下一步是RNA提取。德赢体育平台游戏平台但是，RNA提取如何适用于唾液和拭子样品？它与其他样本类型有所不同吗？

使用自旋柱时，用于唾液和拭子样品的一般RNA提取工作流与其他样品类型相似。自旋柱RNA提取中有四个基本步骤：

样品裂解 - 将裂解缓冲液直接添加到样品中。在Safecollect Collection套件，，，，DNA/RNA盾牌用作多合一样品裂解和保存缓冲液。（换句话说，样品裂解发生在样品收集过程中。）一些RNA提取试剂盒可能包括用于机械裂解的裂德赢体育平台游戏平台解管，酶（例如蛋白酶K）用于酶促裂解。
结合RNA-裂解后，将乙醇或异丙醇添加到样品，混合，然后将整个混合物添加到自旋柱中。添加酒精有助于促进RNA与色谱柱的二氧化硅基质结合。通过离心使RNA与二氧化硅基质接触。可选地，RNA结合后可以在柱中应用DNase（步骤2）消除污染的DNA。
洗涤RNA - 一旦RNA结合，就可以通过施加含有乙醇的洗涤缓冲液洗涤。由于乙醇促进了RNA与柱二氧化硅基质的结合，因此在洗涤/离心过程中，RNA保留在色谱柱中。可以进行其他离心以去除柱矩阵中的残留乙醇。
Elute RNA - 将洗脱缓冲液（通常是无核酸酶的水或Tris-EDTA缓冲液）应用于柱上。洗脱缓冲液可以将RNA氢保湿，从而使其从柱的二氧化硅基质中解离。最终的离心步骤将纯化的RNA样品汇集在收集管底部，准备进行分析。

或者，高通量套件使用磁珠代替自旋柱，但一般的工作流程相同。样品是裂解的，RNA与珠子结合，洗涤珠，然后RNA最终从珠子中洗脱。

如何选择RNA纯化套件

选择最佳的RNA纯化套件为您的应用程序可能会令人生畏，因为有很多可用的选项，并且并不总是清楚套件之间存在什么差异。

作为完整工作流程的一部分，Zymo Research提供了各种提取套件。从基于列的自动化套件，选择取决于您的特定实验需求。对于今天的大流行快的-DNA/RNA病毒试剂盒是早期病毒检测的高通量解决方案。

快的-DNA/RNA病毒套件设计用于从各种样本类型（包括唾液和拭子样品）快速恢复病毒DNA/RNA。DNA/RNA纯化试剂盒带有DNA/RNA屏蔽，可用于收集样品，病毒灭活和核酸保存。德赢体育平台游戏平台如果您使用Zymo Research的样品收集样品DNA/RNA屏蔽样品收集设备德赢体育平台游戏平台，您可以直接进行净化。此外，该套件具有一步结合缓冲液，有助于有效提取和低复制病毒检测。

可选地，为了降低样品的粘度 - 唾液可能是粘性的！- 蛋白酶K消化使样品处理更加容易，并消除了可能降解样品中核酸的核酸酶。最近在新英格兰医学杂志特征蛋白酶K在比较唾液和签名Covid-19测试中。^[2]