什么是凝胶电泳？

凝胶电泳是基于尺寸分析和分离DNA片段的试验和真实方法。电泳分辨率后，可以切除特定条带进行琼脂糖凝胶基质并进一步加工以纯化DNA。对于许多工作流，凝胶电泳仍然是分离特定尺寸的DNA（特别是对于大于1kb的片段）的最佳方法。许多下一步测序（NGS）文库制剂仍然需要使用琼脂糖凝胶分辨样品以在测序之前分离碎片。然而，从凝胶切除恢复DNA可能是挑战，许多研究人员努力从原始输入中恢复超过50％的产量。提高关键点的额外关注，DNA产量和质量可以大大改善。

凝胶电泳的步骤：

从集合开始

为了恢复最多的DNA，需要在凝胶均匀设定之前进行考虑因素。验证套件的规格非常重要，以确定它是否与凝胶兼容。例如，Zymoclean凝胶DNA回收试剂盒与TAE和TBE缓冲的琼脂糖凝胶相容。

此外，我们建议选择为要解决的DNA溶液的体积产生最小的孔的梳子。这将最终保持带有更浓的空间中的带的尺寸，从而使凝胶切除切片更小。

快速工作

重要的是要介意凝胶暴露于紫外线的时间。将样品保持在灯上的时间越长，DNA在该过程中受损的风险越大。因此，强烈建议在成像凝胶并强调带时快速有效地工作。

观看你的百分比

通常，琼脂糖凝胶百分比由DNA片段尺寸确定。较小的碎片需要更严格的矩阵来分隔频带并获得清晰的可视化。这种更紧的基质需要更高百分比的琼脂糖以分离出小型DNA片段。通常，可以容易地处理2％以下的琼脂糖凝胶。但是，如果凝胶超过2％琼脂糖，则额外的体积琼脂糖溶解缓冲液建议在进一步加工之前确保凝胶完全溶解。

将切片靠近DNA带

优化样本输入对于任何协议至关重要，从凝胶切除中恢复DNA并不不同。在这种情况下，确保切片尽可能靠近所需的DNA带，非常重要。这样做减少了需要溶解的琼脂糖量。我们建议称重切除的凝胶切片以确保它不超过400毫克。如果它超过此金额，则需要进行扩大率。

确保凝胶切片溶解

确保在结合柱之前将琼脂糖完全溶解至关重要。如果有任何部分未溶解的琼脂糖痕量，则可以将盐水进入基质中，该基质将与DNA共用。这些盐导致具有低260/230比的纯度样品。此外，未溶解的琼脂糖将保留DNA以及堵塞并降低纯化步骤的效率。为避免这种情况，请确保在将凝胶切片添加到列之前完全溶解。

观看温度

溶解温度是至关重要的，在55℃下表现最佳。然而，这种温度不应超过60°C，因为它增加了DNA降解和样品损失的机会。

用列使用小心

为确保最佳恢复，重要的是，洗脱的DNA是纯的，不含盐和其他污染物。为此，请注意协议的洗涤步骤。建议沿柱壁的边缘运行洗涤缓冲器，以便冲洗任何可以从琼脂糖溶解缓冲液中剩余的盐。洗脱时，务必将洗脱缓冲区直接放在柱矩阵上。这将有助于防止洗脱液收集可能在柱上升高的任何盐。

大小事项

大型DNA片段（> 11kb）棘手以恢复，因为它们从柱状矩阵中更难以洗脱。标准套件，包括Zymoclean凝胶DNA恢复套件，可以恢复高达10 kB的DNA。对于此（8-10kb）的上部范围内的片段，我们建议在室温下将洗脱缓冲液温育最多五分钟。另外，使用预热的（60-70℃）洗脱缓冲液可以有助于提高洗脱效率。

对于大于10kb的DNA片段，我们建议使用验证的试剂盒进行高分子量DNA，例如Zymoclean大片段DNA恢复套件。该套件包括一个专为非常大的DNA洗脱而设计的柱。

5月21日2019年5月21日