减少Bioburden的提示和技巧

Next-Gen测序使微生物磁体区域的大量生长能够，使科学家能够以令人难以置信的深度研究微生物。虽然这些工具的高灵敏度意味着增加了数据的质量和数量，但也意味着收集的数据包括不原始到样品的生物。在整个工作流程中引入的细菌或核酸污染，例如在样品收集，提取或文库制剂期间，也反映在微生物组测序数据中。德赢体育平台游戏平台

这种污染或生物污染，应该是发展微生物学工作流程的主要考虑因素，因为它可以歪曲分析结果和解释。为了确保微生物组样品的准确表示，并最大限度地减少外来污染，可以使用以下提示和技巧来减少微生物组工作流程中的生物矿。

在干净的环境中工作

确保成功的第一步，未受污染的微生物组结果在适当的环境中工作，例如封闭的工作站或洁净室。细菌可以持续在各种表面上，并且可以随时和任何地方随时存在痕量的DNA。请记住，您正在在实验室环境中工作，其中存在用于瞄准您的微生物学分析的扩增子。确保每个应用程序都有一个单独的工作站，并充分清除曲面。干净的工作环境对于最小化Bioburden至关重要。

保持实验室清洁的提示

在进入洁净室时将粘合剂入口垫（粘垫）放置在洁净室或佩戴鞋盖
在洁净室时使用一次性或专用的实验室外套
佩戴保护面罩或用于面部隐藏的程序掩模
戴牛孔帽（毛发网）
穿无菌手套
在HEPA过滤的房间工作
使用指定的无菌移液管提取，如果可能的话，使用过滤器提示
为了有效地清洁工作台，在台面上涂上10％的漂白剂，然后让它在拆卸前坐下约15分钟。另外，清洁微量离心机的转子，盖子和内壁，以及10％漂白剂的移液管尖端，然后是70％乙醇。乙醇用于确保漂白剂中和以防止下游干扰。
如果您在任何时候必须留下这种干净的环境并返回，重新申请新鲜的洁净室服装，如Bouffant Cap，Prodistive Face Mask等。实验室外套永远不会离开洁净室环境。

选择低生物树脂试剂

除了在适当的环境中工作，利用经认证的低生物灌浆DNA提取试剂盒和试剂对于减少微生物组研究中的生物对等来说也很重要。额外注意防止在提取和文库制剂期间引入污染DNA和微生物也是关键。使用低生物矿试剂和仔细做法将有助于防止引入可能歪斜样品的微生物谱的污染物。

用于确保低生物顿士试剂的顶级技巧

制造试剂时使用清洁制造程序。所有ZyMoomics试剂都配制出清洁的制造程序（例如HEPA过滤的环境），并在等分前过滤。
如果使用试剂盒，请使用认证的低生物管套件，如ZyMobioMics DNA试剂盒。这些套件已经为使用高灵敏度，低生物量样本的用户设计，以确保最小的污染细菌背景DNA。使用QPCR通过16S rRNA扩增测定和量化低生物管。
为了纯化和随后的分析，使用在洁净室或封闭的工作站中打开的新鲜试剂。
确保用于机械裂解的珠子是无污染物。ZR Bashingbead管在ZyMoomics DNA试剂盒中用于高压灭菌，而在高温（250℃5小时）下烘烤0.1mm和0.5mm珠粒，以降解任何污染的细菌DNA。
注意，确保在处理过程中存在样品之间没有交叉污染。
确保洗脱缓冲液或DNase / RNase自由水是新鲜的，没有污染物。将ZyMoomics DNase / RNase--RNase / RNase / RNase / RNase / RNA酶水被废除过夜，孵育过夜，然后通过121℃通过高压灭菌灭活。然后将水等来的聚丙烯瓶子，松散地封闭，然后在121℃下高压灭菌，以消除在等分试样过程中可能引入的任何污染DNA。在这种处理之后，瓶子紧紧地封顶以防止进一步污染。

最佳DNA提取和QPCR处理实践

除了在适当的环境中工作外，我们建议采取一些措施，以最大限度地减少提取和QPCR建立或类似过程中的潜在污染：

保持用于稳定清洁室内试剂的冰箱或铲斗，并使用第二次冰箱将冰转移到洁净室中的胸部。
使用不含DNase / RNase的水。为了易于和保证，可用于购买，ZyMoomics DNase / RNase / RNase / RNase / RNase / RNase / RNase-Fail（D4302-5）可供购买。
为每个准备使用新的过滤的移液器提示，如果可能，即使在将样品重新加载到同一列时，也可以使用新的移液器尖端。
使用新的移液器提示进行DNA洗脱。建议将DNase / RNase自由水的洗脱缓冲液直接移移到塔基矩阵，因此移液管尖端可以与柱矩阵密切接触。
保持移液器的校准。必须校准移液器以准确定量样品中存在的少量DNA。
经常改变移液管尖端以减少试剂的污染。
当瓶子，容器，管等开放时，使用盖子屏蔽容器的嘴。通过这样做，用户可以避免任何污染物落入试剂中。
应制备等分试剂，包括一个（或最多几个夫妇）的实验组。通过这样做，用户可以最小化冻结和解冻试剂的频率以及预先染色的试剂（如果存在污染）。
在不同的制剂之间，根据需要10％漂白剂清洁使用的工具，然后是70％乙醇。
最初，应制备主混合物并等待用于测定。记得在将样品施加到每个孔时，请刷新移液管尖端以确保准确的定量。DNA可以保留在移液管尖端内，并且在用少量DNA时，需要在移液中的效率。
小心不要瘦或徘徊在试剂或工具上。倾斜PCR板或类似物品以一定角度才能看到插入板，同时避免可能由悬停引起的潜在污染。
最后，不要忘记你的没有模板控件（NTC）！