混合&走!主管细胞-JM109
T3003 / T3005
混合&走!主管细胞-JM109
| 猫# | 的名字 | 大小 | 价格 | 数量 |
|---|---|---|---|---|
| T3003 | 混合和走!主管细胞-JM109 | 10 x 100µl | 129.00美元 |
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| T3005 | 混合和走!主管细胞-JM109 | 96 x 50µl | 494.00美元 |
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文档
突出了
- 简单的20秒变身:没有热休克!只要加入DNA，然后扩散到培养皿。
- 高转换效率:达到108－ 109每粒质粒DNA。
- 多用途:适用于普通克隆、蓝白色筛选和质粒分离。
描述
| 额外的信息 | 部分restriction-deficient;克隆重复性DNA的优良菌株(recA-)。当谷氨酰胺可用时抑制许多琥珀突变，但不抑制λ的S100或S7突变，如λgt11。可用于M13的克隆/测序和蓝白筛选。 |
|---|---|
| 基因型 | F ' [traD36 proA+B+ laclq Δ(lacZ)M15] Δ(lac-proAB) glnV44 (supE44) e14- (McrA-) thi gyrA96 (NalR) endA1 hsdR17(rk- mk+) relA1 recA1 |
| 处理时间 | 20秒 |
| 产品存储 | -70°C到-80°C |
| 补充信息 | |
| 转化效率 | 108－ 109每个质粒DNAµg转化子 |
Q1:感受态细胞是转基因细胞吗?
我们所有的活性细胞都属于生物安全等级1，并不是转基因生物。只有当用质粒进行转化时，它们才会变成转基因生物。
Q2:混合&走!应变坝+和dcm+?
大多数克隆菌株将是dam+/dcm+，除非在基因型中特别注明。
第三季度:混合&走!菌株DNA甲基化?
是的
Q4:哪些菌株相当于Zymo菌株?
DH5α相当于Zymo 5α。DH10B、Top10、One Shot Top10相当于Zymo 10B。XL-21 Blue最接近的匹配是JM109, Stbl3最接近的匹配是HB101。
问题5:如何减少琼脂平板上的卫星菌落?
-准备新鲜的琼脂平板。-在平板中使用更多的抗生素
问6:有可能稀释感受态细胞吗?
我们不建议稀释感受态细胞。我们建议使用更少的DNA转化细胞，或在转化前将细胞分离成更小的体积。如果绝对必要，应使用冷1X稀释缓冲液(Mix & Go转换套件，T3001和T3002)稀释。
问题7:哪些抗生素可以与混合&走!程序吗?
使用氨苄西林或卡贝西林进行选择时，不需要生长。然而，由于抗生素本身的作用模式，在使用氯霉素、卡那霉素和四环素时需要一个生长步骤。对于生长步骤，我们建议采用以下步骤:加入质粒2后，在冰上孵育细胞5-10分钟。添加4卷SOC媒体3。在37°C孵育60分钟，以200-300 rpm的温和摇晃4。涂抹在含有适当抗生素的预热过的培养板上
问题8:哪种质粒大小可用于转化?
Zymo 5α和Zymo 10B可达20kb。然而，转换效率从10-20kb成比例下降。20kb以上，细胞很难转化。JM109、HB101、XJa、XJa (DE3)、XJb、XJb (DE3)和TG1可以处理多达10kb的构造。
问题9:转化时推荐的DNA浓度和体积是多少?
确实没有推荐的DNA浓度最大值或最小值，但我们使用10pg进行质量控制。但DNA添加量不应超过细胞总体积的5%;当使用的DNA体积增加时，效率会降低几倍。如果DNA样本太稀释，请使用我们的DNA清洁浓缩器。
Q10:有什么提高转换效率的小窍门?
1.在冰上解冻细胞，而不是在室温下。2.在冰上培养细胞和DNA混合物，而不是在室温下。但是，孵化时间不要超过1小时。3.确保细胞在接收时仍处于冷冻状态。4.在37°C预热培养板至少30分钟。5. Prepare fresh LB agar plates containing the appropriate antibiotic. 6. Prepare a new DNA sample. 7. Store the cells at -80°C (not 4°C or -20°C). If the freezer breaks, the cells should be OK as long as the temp does not go higher than -50°C. 8. Avoid freeze/thaw cycles.
问11:热冲击会如何影响我的转换效率?
热休克不是必要的，但是有时在准备库或转换XJb Autolysis时它会有好处大肠杆菌菌株。我们建议使用以下协议来处理热休克与Outgrowth:加入质粒后，在冰上孵育细胞5-10分钟。2.42°C孵育细胞45秒。3.向电池中加入450毫升SOC。4.37°C孵育60分钟，以200-300 rpm的速度轻轻摇晃。5. Spread on a pre-warmed culture plate containing the appropriate antibiotic.