请勿在含有甘油的缓冲液中执行冻结和解冻周期。甘油保护e.coli从形成对细胞裂解至关重要的冰晶。

根据所使用的材料量，裂解材料可能会变成粘性，从而防止有效操纵。但是，对于大多数应用，不必使用大量的细胞材料。如有必要，在大多数情况下，涡旋剧烈30秒将降低粘度。或者，可以使用核酸酶处理（例如DNase I）来降低粘度。用其他缓冲液稀释细胞裂解物也将减少粘度问题。

如果获得的结果不满意，则可以通过在较高的温度（25-37°C）或解冻后更长的时间（10或20分钟）孵育细胞来显着改善裂解（步骤5）。

将细胞沉淀物重悬于水中，有或没有0.01％-0.1％Triton X -100。为了进行HIS标签纯化，请重悬于His-Spin蛋白微型REAPREP试剂盒（Zymo Research Products＃p2001或P2002）的His-Linding缓冲液中。含有较高浓度Mg的酸性缓冲液和缓冲液²⁺（> 1 mm）和稳定细胞壁的相关金属在不同程度上抑制裂解反应。如果可能的话，在细胞裂解后将镁添加到缓冲液中。

非λ溶菌酶通常能够降解几丁质。然而，这些细胞中表达的λ溶菌酶无法降解几丁质。λ溶菌酶是一种克糖基化酶。

当将葡萄糖添加到生长培养基中时，它会抑制培养基中存在自溶基因的诱导。随着细胞的生长，它们将葡萄糖作为碳源消耗。一旦葡萄糖开始消耗，自溶开始就开始了。

为了获得最佳结果，在阿拉伯糖诱导之前，细胞不应积极生长。这是通过使用隔夜起动器来实现的，该启动器已经处于固定生长阶段，如协议中所述。如果需要使用新鲜的入门剂，请在开胃菜中包括阿拉伯糖。

我们所有的合格细胞都分为生物安全1级，不是遗传修饰的生物。只有当用质粒转化时，它们才会成为转基因生物。

除非在基因型中明确指出，否则大多数克隆菌株将是DAM+/DCM+。

是的

DH5α等于Zymo5α。DH10B，TOP10和One Shot Top10等于Zymo 10b。对于XL-21蓝色，JM109是最接近的匹配，对于STBL3，HB101是最接近的匹配。

- 准备新鲜的琼脂板
- 在盘子中使用更多抗生素
- 在电镀细胞后孵化板较短的时间

我们不建议稀释合格的细胞。我们建议在转化之前使用较少的DNA转化细胞或等分试样的细胞。如果绝对必要，则应在稀释度中使用冷1倍胜任缓冲液（Mix＆Go转换套件，T3001和T3002）。

当使用氨苄西林或卡宾西林进行选择时，无需生长。然而，由于抗生素本身的作用方式，使用氯霉素，卡纳霉素和四环素时，需要一个生长步骤。

我们建议以下关于出现步骤的过程：
1.添加质粒后在冰上孵育5-10分钟。
2.添加4卷SOC媒体。
3.在37°C下孵育60分钟，在200-300 rpm处轻轻摇动。
4.在包含适当的抗生素的预热培养板上传播。

对于Zymo5α和Zymo 10b，最高为20KB。然而，转化效率与10-20KB成比例降低。高于20kb的细胞很难转化。JM109，HB101，XJA，XJA（DE3），XJB，XJB（DE3）和TG1可以处理最多10KB的结构。

确实没有最大或最小建议的DNA浓度，但是我们使用10 pg进行质量控制。但是，添加的DNA量不应超过细胞总量的5％。随着使用的DNA体积的增加，效率可以降低几倍。如果DNA样品过于稀释，请使用我们的DNA清洁和浓缩器。

1.在冰上解冻细胞，而不是室温。
2.在冰上孵育细胞和DNA混合物，而不是在室温下。但是，请勿孵化时间比1小时更长。
3.确保接收时仍会冷冻细胞。
4.将培养板在37°C下预热至少30分钟。
5.准备含有适当抗生素的新鲜LB琼脂板。
6.准备新的DNA样品。
7.将细胞存储在-80°C（而不是4°C或-20°C）。如果冰柜断裂，只要温度不超过-50°C，细胞应可以。
8.避免冻结/解冻周期。

没有必要进行热冲击，但是有时在准备库或转换XJB自动解析时可能是受益人大肠杆菌菌株。

我们建议使用以下及以下的热量分析协议：
1.添加质粒后在冰上孵育5-10分钟。
2.在42°C下孵育45秒。
3.将450毫升SOC添加到细胞中。
4.在37°C下孵育60分钟，在200-300 rpm处轻轻摇动。
5.在包含适当抗生素的预热培养板上散布。