混合!XJB自体竞争细胞
T3041
混合!XJB自体竞争细胞
猫 # | 姓名 | 尺寸 | 价格 | 数量 |
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T3041 | 混合!XJB自溶能胜任的细胞,1 ml 500x L-阿拉伯糖 | 10 x 100 µL | $ 219.00 |
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文件
![混合!XJB自体竞争细胞](https://cdn.shopify.com/s/files/1/0016/3731/8726/products/T3041_XJb_20Autolysis_20-_20Glycerol_20Stock_20-_201_20ml_20x_2010_large.png?v=1588502016)
强调
- 快速地:80-90%e.coli收获后仅10分钟内裂解。
- 高转化效率:实现108-109每µg质粒DNA转化子。
- 多才多艺的:与广泛的缓冲液完全兼容,用于蛋白质纯化和其他物理裂解方法。
描述
自溶 | XJB裂解效率比XJA低10-20%。为了获得最佳裂解,选择裂解缓冲液时需要进行更多的护理。但是,即使浓度很低的洗涤剂也可能会显着改善裂解。 |
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细胞生长 | 一个非常健壮的压力,达到的OD比大肠杆菌k-strains。 |
DNA提取 | XJB不是DNA提取的最佳选择。 |
DNA稳定性 | 该菌株是RECA阳性的。 |
基因型 | F- OMPT HSDSB(RB -MB-)GALDCMΔARAB::λR,CAT(CMR) |
处理时间 | 10分钟 |
产品存储 | -70°C至-80°C |
蛋白质表达 | XJB是重组蛋白表达的理想选择。它缺乏LON和OMPT蛋白酶,导致蛋白质产量更高。 |
补充信息 | |
转化效率 | 108-109每µg质粒DNA转化体 |
Q1:金蛋白会降解吗?
非λ溶菌酶通常能够降解几丁质。然而,这些细胞中表达的λ溶菌酶无法降解几丁质。λ溶菌酶是一种克糖基化酶。
Q2:可以将葡萄糖添加到增长培养基中吗?
当将葡萄糖添加到生长培养基中时,它会抑制培养基中存在自溶基因的诱导。随着细胞的生长,它们将葡萄糖作为碳源消耗。一旦葡萄糖开始消耗,自溶开始就开始了。
问题3:在冻融周期中可以存在甘油吗?
请勿在含有甘油的缓冲液中执行冻结和解冻周期。甘油保护e.coli从形成对细胞裂解至关重要的冰晶。
Q4:如果裂解液极为粘怎么怎么办?
根据所使用的材料量,裂解材料可能会变成粘性,从而防止有效操纵。但是,对于大多数应用,不必使用大量的细胞材料。如有必要,在大多数情况下,涡旋剧烈30秒将降低粘度。或者,可以使用核酸酶处理(例如DNase I)来降低粘度。用其他缓冲液稀释细胞裂解物也将减少粘度问题。
Q5:起步文化是否需要?
为了获得最佳结果,在阿拉伯糖诱导之前,细胞不应积极生长。这是通过使用隔夜起动器来实现的,该启动器已经处于固定生长阶段,如协议中所述。如果需要使用新鲜的入门剂,请在开胃菜中包括阿拉伯糖。
Q6:应该重悬于什么缓冲液中?
将细胞沉淀物重悬于水中,有或没有0.01%-0.1%Triton X -100。为了进行HIS标签纯化,请重悬于His-Spin蛋白微型REAPREP试剂盒(Zymo Research Products#p2001或P2002)的His-Linding缓冲液中。含有较高浓度Mg的酸性缓冲液和缓冲液2+(> 1 mm)和稳定细胞壁的相关金属在不同程度上抑制裂解反应。如果可能的话,在细胞裂解后将镁添加到缓冲液中。
问题7:如何提高裂解效率?
如果获得的结果不令人满意,则可以通过在较高温度(25-37°C)或解冻后更长的时间(10或20分钟)孵育细胞来显着改善裂解(步骤5)。
问题8:在转换XJB自动解析时,必须执行热休克和产卵步骤大肠杆菌?
高转化效率是必要的。但是,如果您的实验不需要很高的转化效率(例如,当使用质粒库存转换时大肠杆菌),将DNA和细胞在冰上孵育1-5分钟,然后直接扩散到预热的板上。
Q9:合格的细胞是转基因生物吗?
我们所有的合格细胞都分为生物安全1级,不是遗传修饰的生物。只有当用质粒转化时,它们才会成为转基因生物。
Q10:是混合!菌株DAM+和DCM+?
除非在基因型中明确指出,否则大多数克隆菌株将是DAM+/DCM+。
Q11:做混合!菌株甲基化DNA?
是的
Q12:哪些菌株等效于Zymo菌株?
DH5α等于Zymo5α。DH10B,TOP10和One Shot Top10等于Zymo 10b。对于XL-21蓝色,JM109是最接近的匹配,对于STBL3,HB101是最接近的匹配。
Q13:如何减少琼脂板上的卫星菌落?
- 准备新鲜的琼脂板 - 在板上使用更多的抗生素 - 孵化板在板上较短的时间内孵育较短的时间
Q14:是否可以稀释主管细胞?
我们不建议稀释合格的细胞。我们建议在转化之前使用较少的DNA转化细胞或等分试样的细胞。如果绝对必要,则应在稀释度中使用冷1倍胜任缓冲液(Mix&Go转换套件,T3001和T3002)。
Q15:可以与哪种抗生素一起使用混合!程序?
当使用氨苄西林或卡宾西林进行选择时,无需生长。然而,由于抗生素本身的作用方式,使用氯霉素,卡纳霉素和四环素时,需要一个生长步骤。我们建议对生长步骤进行以下步骤:1。添加质粒后在冰上孵育5-10分钟。2.添加4卷SOC媒体。3.在37°C下孵育60分钟,在200-300 rpm处轻轻摇动。4.在包含适当的抗生素的预热培养板上传播。
Q16:哪种质粒大小可用于转化?
对于Zymo5α和Zymo 10b,最高为20KB。然而,转化效率与10-20KB成比例降低。高于20kb的细胞很难转化。JM109,HB101,XJA,XJA(DE3),XJB,XJB(DE3)和TG1可以处理最多10KB的结构。
Q17:推荐的DNA浓度和转化的体积是哪个?
确实没有最大或最小建议的DNA浓度,但是我们使用10 pg进行质量控制。但是,添加的DNA量不应超过细胞总量的5%。随着使用的DNA体积的增加,效率可以降低几倍。如果DNA样品过于稀释,请使用我们的DNA清洁和浓缩器。
Q18:提高转型效率的一些技巧是什么?
1.在冰上解冻细胞,而不是室温。2.在冰上孵育细胞和DNA混合物,而不是在室温下。但是,请勿孵化时间比1小时更长。3.确保接收时仍会冷冻细胞。4.将培养板在37°C下预热至少30分钟。5.准备含有适当抗生素的新鲜LB琼脂板。6.准备新的DNA样品。7.将细胞存储在-80°C(而不是4°C或-20°C)。如果冰柜断裂,只要温度不超过-50°C,细胞应可以。8.避免冻结/解冻周期。
Q19:热震将如何影响我的转化效率?
没有必要进行热冲击,但是有时在准备库或转换XJB自动解析时可能是受益人大肠杆菌菌株。我们建议使用以下产物进行以下方案:1。添加质粒后在冰上孵育5-10分钟。2.在42°C下孵育45秒。3.将450毫升SOC添加到细胞中。4.在37°C下孵育60分钟,在200-300 rpm处轻轻摇动。5.在包含适当抗生素的预热培养板上散布。
为了克隆来自Obelia Medusa的新型GFP样荧光蛋白,作者使用表达文库鉴定了潜在基因,并将基因克隆到载体中。通过使用Zymo Research的XJB自动分解大肠杆菌细胞来促进蛋白质的表达。作者能够从Obelia Medusa中纯化三种不同颜色荧光的蛋白质:青色,绿色和黄色。
Aglyamova,G.V。等。(2011)来自Hydromedusa obelia sp。的绿色荧光蛋白的多色同源物。Photochem Photobiol Sci(8):1303-9。