混合&走!自溶感受态细胞
T3021
混合&走!自溶感受态细胞
猫# | 的名字 | 大小 | 价格 | 数量 |
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T3021 | 混合&走!XJa自溶感受态细胞,1ml 500x l -阿拉伯糖 | 10 x 100µl | 219.00美元 |
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文档
![混合&走!自溶感受态细胞](https://cdn.shopify.com/s/files/1/0016/3731/8726/products/T3021_XJa_20Autolysis_20-_20Glycerol_20Stock_20-_201_20ml_20x_2010_large.png?v=1588502011)
突出了
- 快速:80% - 90%大肠杆菌在收获后仅10分钟内溶解。
- 简单的20秒变身:没有热休克!只要添加DNA然后扩散。
- 高转换效率:达到108- 109每个质粒DNAµg转化子。
描述
自我分解 | 很容易会溶解。亲本菌株JM109经过1次冻融循环后,可释放约20%的细胞蛋白。该菌株将在广泛的缓冲条件下溶解。80 - 90%的大肠杆菌经过一次冻融处理后溶解。 |
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细胞生长 | 生长良好,特别是在培养基中补充1mm Mg时2 +. |
DNA提取 | 该菌株为EndA-,生产高质量的DNA制剂。 |
DNA的稳定性 | 在XJa中,RecA-突变可以稳定重复的DNA序列。 |
基因型 | F ' [traD36 proA+B+ laclq∆(lacZ)M15]∆(laca - proab) glnV44 (supE44) e14- (McrA-) thi gyrA96 (NalR) endA1 hsdR17(rK- mK+) relA1 recA1 ΔaraB::λR, cat (CmR) |
处理时间 | 10分钟 |
产品存储 | -70°C到-80°C |
蛋白表达 | 适用于一般筛选,但蛋白酶可能降解小的或其他不稳定的重组蛋白。 |
补充信息 | |
转化效率 | 108- 109每个质粒DNAµg转化子 |
甘油会在冻融循环中存在吗?
不要在含有甘油的缓冲液中进行冻融循环。甘油保护大肠杆菌从形成对细胞裂解至关重要的冰晶开始。
Q2:如果裂解液非常粘稠怎么办?
根据使用的材料的数量,溶解的材料可能会变得粘稠,妨碍有效的操作。然而,对于大多数应用来说,不需要使用大量的电池材料。如果有必要,大力旋转30秒在大多数情况下会降低粘度。或者,核酸酶处理(例如DNAse I)可以用来降低粘度。用额外的缓冲液稀释细胞裂解液也会减少黏度问题。
Q3:如何提高裂解效率?
如果得到的结果不令人满意,可以通过在解冻(步骤5)后在更高的温度(25 - 37°C)或更长的时间(10或20分钟)孵育细胞来显著改善裂解。
问题4:重悬细胞颗粒应加入什么缓冲液?
加入或不加入0.01% - 0.1% Triton X-100的水重悬细胞颗粒。对于his标签的纯化,在His-spin Protein Miniprep试剂盒的His-Binding Buffer中重悬(Zymo研究产品# P2001或P2002)。酸性缓冲液和含高浓度镁的缓冲液2 +(>1 mM),以及稳定细胞壁的相关金属,在不同程度上抑制裂解反应。如果可能的话,在细胞溶解后向缓冲液中加入镁。
问题5:甲壳素会被降解吗?
非λ溶菌酶通常能够降解甲壳素。然而,在这些细胞中表达的λ溶菌酶不能降解甲壳素。λ溶菌酶是一种转糖基化酶。
问题6:葡萄糖可以添加到生长介质中吗?
当葡萄糖被添加到生长介质中时,当它存在于介质中时,它抑制了自溶基因的诱导。随着细胞的生长,它们消耗葡萄糖作为碳源。一旦葡萄糖被消耗,自溶就开始了。
问题7:发酵剂是必要的吗?
为了达到最佳效果,细胞不应该在阿拉伯糖诱导前活跃生长。这是通过使用过夜启动器实现的,在那里细胞已经处于固定生长阶段,如协议中所述。如果需要使用更新鲜的发酵剂,应在发酵剂中加入阿拉伯糖。
问题8:感受态细胞是转基因的吗?
我们所有的活性细胞都属于生物安全等级1,并不是转基因生物。只有当用质粒进行转化时,它们才会变成转基因生物。
问:是混合&走!应变坝+和dcm+?
大多数克隆菌株将是dam+/dcm+,除非在基因型中特别注明。
Q10:混合&走!菌株DNA甲基化?
是的
Q11:哪些菌株相当于Zymo菌株?
DH5α相当于Zymo 5α。DH10B、Top10、One Shot Top10相当于Zymo 10B。XL-21 Blue最接近的匹配是JM109, Stbl3最接近的匹配是HB101。
问题12:如何减少琼脂平板上的卫星菌落?
-准备新鲜琼脂平板
-在盘子中使用更多的抗生素
-电镀细胞后,短时间的培养板
Q13:有可能稀释感受态细胞吗?
我们不建议稀释感受态细胞。我们建议使用更少的DNA转化细胞,或在转化前将细胞分离成更小的体积。如果绝对必要,应使用冷1X稀释缓冲液(Mix & Go转换套件,T3001和T3002)稀释。
问题14:哪些抗生素可以与混合&走!程序吗?
使用氨苄西林或卡贝西林进行选择时,不需要生长。然而,由于抗生素本身的作用模式,在使用氯霉素、卡那霉素和四环素时需要一个生长步骤。
对于生长步骤,我们建议采用以下步骤:
1.加入质粒后,在冰上孵育细胞5-10分钟。
2.添加4卷SOC媒体。
3.37°C孵育60分钟,以200-300 rpm的速度轻轻摇晃。
4.涂抹在含有适当抗生素的预热过的培养板上。
问题15:哪种质粒大小可用于转化?
Zymo 5α和Zymo 10B可达20kb。然而,转换效率从10-20kb成比例下降。20kb以上,细胞很难转化。JM109、HB101、XJa、XJa (DE3)、XJb、XJb (DE3)和TG1可以处理多达10kb的构造。
Q16:转化时推荐的DNA浓度和体积是多少?
确实没有推荐的DNA浓度最大值或最小值,但我们使用10pg进行质量控制。但DNA添加量不应超过细胞总体积的5%;当使用的DNA体积增加时,效率会降低几倍。如果DNA样本太稀释,请使用我们的DNA清洁浓缩器。
Q17:提高转换效率有哪些小窍门?
1.在冰上解冻细胞,而不是在室温下。
2.在冰上培养细胞和DNA混合物,而不是在室温下。但是,孵化时间不要超过1小时。
3.确保细胞在接收时仍处于冷冻状态。
4.在37°C预热培养板至少30分钟。
5.准备含有适当抗生素的新鲜LB琼脂平板。
6.准备一个新的DNA样本。
7.储存在-80°C(不是4°C或-20°C)。如果冰箱坏了,只要温度不高于-50°C,电池就不会有问题。
8.避免冻结/解冻周期。
Q18:热冲击会如何影响我的转换效率?
热休克不是必要的,但是有时在准备库或转换XJb Autolysis时它会有好处大肠杆菌菌株。
我们建议使用以下方案来处理热休克与Outgrowth:
1.加入质粒后,在冰上孵育细胞5-10分钟。
2.42°C孵育细胞45秒。
3.向电池中加入450毫升SOC。
4.37°C孵育60分钟,以200-300 rpm的速度轻轻摇晃。
5.涂抹在含有适当抗生素的预热过的培养板上。
为了从水母Obelia medusa中克隆新的gfp样荧光蛋白,作者利用表达文库鉴定了潜在的基因,并将其克隆到载体中。利用Zymo Research公司的XJb自溶大肠杆菌细胞促进了该蛋白的表达。作者能够从水母Obelia medusa中提纯出三种蛋白质,它们发出三种不同颜色的荧光:青色、绿色和黄色。
黄晓明,张志强等。(2011)水medusa Obelia sp.绿色荧光蛋白的多色同源物。光化学与生物科学(8):1303- 1309。