不要在含有甘油的缓冲液中进行冻结和解冻循环。甘油保护E.coli.从形成对细胞裂解至关重要的冰晶。

取决于所用材料的量，裂解材料可能变得粘稠，防止有效的操纵。但是，对于大多数应用，没有必要使用大量的细胞材料。如有必要，在大多数情况下，剧烈涡旋30秒将降低粘度。或者，可以使用核酸酶处理（例如DNase I）来减少粘度。用另外的缓冲液稀释细胞裂解物也将降低粘度问题。

如果获得的结果不令人满意，可以通过在较高温度（25-37℃）或在解冻后的更长的时间（10或20分钟）来显着改善裂解（步骤5）。

非λ溶菌酶通常能够降解几丁质。然而，在这些细胞中表达的λ溶菌酶不能降解几丁质。λ溶菌酶是胰膜晶酶。

为了获得最佳结果，在阿拉伯糖诱导之前，细胞不应积极地生长。这是通过使用过夜启动器来实现的，其中细胞已经处于静止生长阶段，如协议中所述。如果需要使用弗雷斯特入门器，包括已在起始文化中的阿拉伯糖。

当向生长培养基中加入葡萄糖时，它抑制在培养基中存在时自变基因的诱导。随着细胞生长，它们将葡萄糖消耗为碳源。一旦葡萄糖已经消耗了自然分解。

将细胞沉淀重悬于水中或不含0.01％ - 0.1％Triton X-100的水中。对于His-Tag纯化，重新​​悬浮在他的旋转蛋白质Miniprep套件（Zymo Research产品＃P2001或P2002）的其结合缓冲液中。酸性缓冲剂和含有较高浓度Mg的缓冲剂²⁺（> 1毫米）和稳定细胞壁的相关金属，抑制裂解反应各种程度。如果可能，在细胞裂解后向缓冲液中加入镁。

我们所有的珍级细胞都分为生物安全级别1，并且不是遗传修饰的生物。只有当他们用质粒转化时，他们就会成为转基因生物。

除非在基因型中特别注意，否则大多数克隆菌株将是坝+ / DCM +。

是的

DH5α相当于Zymo5α。DH10B，TOP10和一个射击TOP10相当于ZYMO 10B。对于XL-21蓝色，JM109是最接近的匹配和STBL3，HB101是最接近的匹配。

- 准备新鲜琼脂平板 - 使用板材的更多抗生素 - 孵育平板电镀细胞后的较短时间

我们不建议稀释主管细胞。我们建议使用较少的DNA在转换之前使用较少的DNA来转化细胞，或在较小的体积中的等分试样细胞。如果绝对必要，应在稀释中使用冷1x态度缓冲区（混合和转换套件，T3001＆T3002）。

在使用氨苄青霉素或碳皮尼林选择时，不需要过度。然而，由于抗生素本身的作用方式，使用氯霉素，卡那霉素和四环素时需要出现的过度步骤。我们建议在加入质粒后孵育冰上孵化冰上的细胞5-10分钟。2.添加4个SoC媒体。3.在37℃下孵育60分钟，温和振动，200-300转。4.涂在含有适当抗生素的预热培养基上。

对于Zymo5α和Zymo 10b至20kb。然而，转化效率从10-20kb成比例地降低。在20KB以上，细胞难以转化。JM109，HB101，XJA，XJA（DE3），XJB，XJB（DE3）和TG1可以处理高达10KB的构造。

确实没有最大或最小的DNA浓度，但我们使用10 pg进行质量控制。然而，添加的DNA体积不应超过细胞总体积的5％;随着使用的DNA的体积增加，效率可以减少几倍。如果DNA样品过于稀释，请使用我们的DNA清洁和浓缩器。

1.冰上的解冻细胞，而不是室温。2.在冰上孵育细胞和DNA混合物，而不是室温。然而，不要孵育更长时间1小时。3.收到时，确保细胞仍然冻结。4.在37℃下预热培养板至少30分钟。5.制备含有适当抗生素的新鲜LB琼脂平板。6.准备新的DNA样品。7.将细胞存放在-80°C（不是4°C或-20°C）。如果冰箱中断，只要TEMP不高于-50°C，电池就应该正常。8.避免冻结/解冻周期。

没有必要热休克，但有时它可以在制备文库或转化XJB Autolys时是受益人大肠杆菌菌株。我们建议以下议定书进行热冲击，并在加入质粒后孵育冰上5-10分钟的细胞。2.在42℃下孵育细胞45秒。3.将450毫升SOC加入细胞。4.在37℃下孵育60分钟，温和振动，200-300 rpm。5.在含有适当抗生素的预热培养板上涂抹在预热的培养基上。