非λ溶菌酶通常能够降解甲壳素。然而，在这些细胞中表达的λ溶菌酶不能降解甲壳素。λ溶菌酶是一种转糖基化酶。

当葡萄糖被添加到生长介质中时，当它存在于介质中时，它抑制了自溶基因的诱导。随着细胞的生长，它们消耗葡萄糖作为碳源。一旦葡萄糖被消耗，自溶就开始了。

不要在含有甘油的缓冲液中进行冻融循环。甘油保护大肠杆菌从形成对细胞裂解至关重要的冰晶开始。

根据使用的材料的数量，溶解的材料可能会变得粘稠，妨碍有效的操作。然而，对于大多数应用来说，不需要使用大量的电池材料。如果有必要，大力旋转30秒在大多数情况下会降低粘度。或者，核酸酶处理(例如DNAse I)可以用来降低粘度。用额外的缓冲液稀释细胞裂解液也会减少黏度问题。

为了达到最佳效果，细胞不应该在阿拉伯糖诱导前活跃生长。这是通过使用过夜启动器实现的，在那里细胞已经处于固定生长阶段，如协议中所述。如果需要使用更新鲜的发酵剂，应在发酵剂中加入阿拉伯糖。

加入或不加入0.01% - 0.1% Triton X-100的水重悬细胞颗粒。对于his标签的纯化，在His-spin Protein Miniprep试剂盒的His-Binding Buffer中重悬(Zymo研究产品# P2001或P2002)。酸性缓冲液和含高浓度镁的缓冲液^{2 +}(>1 mM)，以及稳定细胞壁的相关金属，在不同程度上抑制裂解反应。如果可能的话，在细胞溶解后向缓冲液中加入镁。

如果得到的结果不令人满意，可以通过在解冻(步骤5)后在更高的温度(25 - 37°C)或更长的时间(10或20分钟)孵育细胞来显著改善裂解。

这对于提高转换效率是必要的。然而，如果你的实验不需要很高的转化效率(例如使用质粒原液进行转化时)大肠杆菌)，将DNA和细胞在冰上孵育1-5分钟，然后直接扩散到预热过的盘子上。

我们所有的活性细胞都属于生物安全等级1，并不是转基因生物。只有当用质粒进行转化时，它们才会变成转基因生物。

大多数克隆菌株将是dam+/dcm+，除非在基因型中特别注明。

是的

DH5α相当于Zymo 5α。DH10B、Top10、One Shot Top10相当于Zymo 10B。XL-21 Blue最接近的匹配是JM109, Stbl3最接近的匹配是HB101。

-准备新鲜的琼脂平板。-在平板中使用更多的抗生素

我们不建议稀释感受态细胞。我们建议使用更少的DNA转化细胞，或在转化前将细胞分离成更小的体积。如果绝对必要，应使用冷1X稀释缓冲液(Mix & Go转换套件，T3001和T3002)稀释。

使用氨苄西林或卡贝西林进行选择时，不需要生长。然而，由于抗生素本身的作用模式，在使用氯霉素、卡那霉素和四环素时需要一个生长步骤。对于生长步骤，我们建议采用以下步骤:加入质粒后，在冰上孵育细胞5-10分钟。2.添加4卷SOC媒体。3.37°C孵育60分钟，以200-300 rpm的速度轻轻摇晃。4.涂抹在含有适当抗生素的预热过的培养板上。

Zymo 5α和Zymo 10B可达20kb。然而，转换效率从10-20kb成比例下降。20kb以上，细胞很难转化。JM109、HB101、XJa、XJa (DE3)、XJb、XJb (DE3)和TG1可以处理多达10kb的构造。

确实没有推荐的DNA浓度最大值或最小值，但我们使用10pg进行质量控制。但DNA添加量不应超过细胞总体积的5%;当使用的DNA体积增加时，效率会降低几倍。如果DNA样本太稀释，请使用我们的DNA清洁浓缩器。

1.在冰上解冻细胞，而不是在室温下。2.在冰上培养细胞和DNA混合物，而不是在室温下。但是，孵化时间不要超过1小时。3.确保细胞在接收时仍处于冷冻状态。4.在37°C预热培养板至少30分钟。5. Prepare fresh LB agar plates containing the appropriate antibiotic. 6. Prepare a new DNA sample. 7. Store the cells at -80°C (not 4°C or -20°C). If the freezer breaks, the cells should be OK as long as the temp does not go higher than -50°C. 8. Avoid freeze/thaw cycles.

热休克不是必要的，但是有时在准备库或转换XJb Autolysis时它会有好处大肠杆菌菌株。我们建议使用以下协议来处理热休克与Outgrowth:加入质粒后，在冰上孵育细胞5-10分钟。2.42°C孵育细胞45秒。3.向电池中加入450毫升SOC。4.37°C孵育60分钟，以200-300 rpm的速度轻轻摇晃。5. Spread on a pre-warmed culture plate containing the appropriate antibiotic.