当葡萄糖被添加到培养基中时，当葡萄糖存在于培养基中时，它会抑制自溶基因的诱导。随着细胞的生长，它们消耗葡萄糖作为碳源。一旦葡萄糖被消耗掉，自溶就开始了。

不要在含有甘油的缓冲液中进行冻融循环。甘油保护大肠杆菌从形成冰晶开始，冰晶对细胞的裂解至关重要。

根据所用材料的数量，溶解的材料可能变得粘稠，阻碍了有效的操作。然而，对于大多数应用来说，没有必要使用大量的电池材料。如果有必要，剧烈旋转30秒会在大多数情况下降低粘度。或者，可以使用核酸酶处理(如DNAse I)来降低粘度。用额外的缓冲液稀释细胞裂解液也会减少粘度问题。

如果得到的结果不令人满意，可以通过在更高的温度(25 - 37°C)或在解冻(第5步)后更长时间(10或20分钟)培养细胞来显著改善裂解。

这对于提高转换效率是必要的。然而，如果你的实验不需要很高的转化效率(例如，当使用质粒存量转化大肠杆菌)，将DNA和细胞放在冰上孵育1-5分钟，然后直接铺在预热好的盘子上。

为了达到最好的效果，细胞在阿拉伯糖诱导前不应该生长活跃。这是通过使用隔夜发酵剂来实现的，其中细胞已经处于固定生长阶段，如协议中所述。如果需要使用较新鲜的发酵剂，应加入已经在发酵剂培养物中的阿拉伯糖。

非λ溶菌酶通常能降解甲壳素。然而，在这些细胞中表达的λ溶菌酶不能降解甲壳素。λ溶菌酶是一种转糖基化酶。

将细胞颗粒重悬于水中，加入或不加入0.01% - 0.1% Triton X-100。对于His-tag的纯化，在His-spin蛋白迷你试剂盒(Zymo研究产品# P2001或P2002)的His-Binding Buffer中重悬。酸性缓冲液和含有较高浓度Mg的缓冲液^{2 +}(>1 mM)，以及稳定细胞壁的相关金属，在不同程度上抑制裂解反应。如果可能，在细胞裂解后向缓冲液中加入镁。

我们所有的活性细胞都被分类为生物安全级别1，并不是转基因生物。只有用质粒转化后，它们才成为转基因生物。

大多数克隆菌株将是dam+/dcm+，除非在基因型中特别注明。

是的

DH5α相当于Zymo 5α。DH10B、Top10和One Shot Top10相当于Zymo 10B。对于XL-21 Blue, JM109是最接近的匹配，对于Stbl3, HB101是最接近的匹配。

-制备新鲜琼脂平板-在平板中多使用抗生素-在细胞镀液后缩短孵育时间

我们不建议稀释感受态细胞。我们建议使用更少的DNA来转化细胞，或在转化前用更小的体积对细胞进行混合。如果绝对有必要，应在稀释中使用冷的1X合格缓冲液(Mix & Go转化试剂盒，T3001和T3002)。

当使用氨苄西林或卡苄西林进行选择时，不需要生长。然而，当使用氯霉素、卡那霉素和四环素时，由于抗生素本身的作用模式，需要一个生长步骤。我们建议对outgrowth步骤执行以下步骤:加入质粒后，将细胞置于冰上孵育5-10分钟。2.增加4卷SOC介质。3.在37°C孵育60分钟，轻轻摇动200-300 rpm。4.涂抹在预热过的含有适当抗生素的培养盘上。

Zymo 5α和Zymo 10B高达20kb。然而，转换效率在10-20kb之间成比例下降。在20kb以上，细胞很难转化。JM109, HB101, XJa, XJa (DE3)， XJb, XJb (DE3)和TG1可以处理高达10kb的结构。

确实没有建议的最大或最小DNA浓度，但我们用10 pg来进行质量控制。但是，加入的DNA体积不应超过细胞总体积的5%;当使用的DNA体积增加时，效率会下降几倍。如果DNA样本太稀释，使用我们的DNA清洁和浓缩器。

1.解冻细胞在冰上，而不是室温。2.在冰上培养细胞和DNA混合物，而不是室温。但是，孵育时间不要超过1小时。3.确保细胞在接收时仍处于冷冻状态。4.在37°C预热培养板至少30分钟。5. Prepare fresh LB agar plates containing the appropriate antibiotic. 6. Prepare a new DNA sample. 7. Store the cells at -80°C (not 4°C or -20°C). If the freezer breaks, the cells should be OK as long as the temp does not go higher than -50°C. 8. Avoid freeze/thaw cycles.

热休克不是必要的，但是在准备库或转化XJb自溶时，热休克有时是有益的大肠杆菌菌株。我们推荐以下方案为热休克与生长:加入质粒后，将细胞置于冰上孵育5-10分钟。2.42°C孵育细胞45秒。3.向细胞中加入450毫升的SOC。4.在37°C孵育60分钟，轻轻摇动200-300 rpm。5. Spread on a pre-warmed culture plate containing the appropriate antibiotic.