为达到最佳效果,细胞阿拉伯糖诱导前不应该越来越积极。这是通过使用一个隔夜起动器,细胞已经在平稳增长阶段,如上所述的协议。如果需要使用新鲜的起动器,包括阿拉伯糖已经起动文化。

Resuspend细胞颗粒在水中有或没有特里同x - 100 0.01% - 0.1%。他净化,resuspend His-Binding缓冲区的His-spin蛋白质Miniprep工具包(Zymo研究产品# P2001或P2002)。含有更高浓度的酸性缓冲区和缓冲区毫克^{2 +}(> 1毫米),及相关金属稳定细胞壁,在不同程度上抑制裂解反应。如果可能的话,添加镁细胞细胞溶解后的缓冲区。

如果结果不满意,可以显著提高了孵化细胞裂解温度升高时(25 - 37°C)或更长时间(10或20分钟)后解冻(步骤5)。

根据材料的用量,细胞溶解物质可能变得粘稠,防止有效的操纵。然而,对于大多数应用程序不需要使用大量的细胞材料。如果有必要,涡流30秒在大多数情况下会降低粘度。另外,核酸酶治疗(例如DNAse我)可以用来降低粘度。稀释与额外的缓冲也会减少细胞溶解产物粘度的问题。

不执行冻结和解冻循环缓冲区包含甘油。甘油保护大肠杆菌形成冰晶对细胞的溶菌作用至关重要。

葡萄糖添加到媒体增长时,抑制自我分解的感应基因存在于媒体。随着细胞生长,它们消耗葡萄糖作为碳源。一旦葡萄糖消耗自身溶解开始。

通常Non-λ溶菌酶能降解几丁质。然而,这些细胞表达的λ溶菌酶不能降解几丁质。λ溶菌酶是一种transglycosylase。

我们所有的主管细胞分为生物安全级别1和转基因生物。只有当转化质粒就转基因生物。

真的是没有最大或最小推荐DNA浓度,但我们使用10 pg进行质量控制。然而,DNA添加量不应超过细胞总量的5%;效率可以减少几倍体积增加使用的DNA。如果DNA样本太稀释,使用我们的DNA清洁&集中器。

Zymo 5α和Zymo 10 b 20 kb。然而,从10-20kb转化效率降低比例。高于20 kb细胞是很难改变的。JM109, HB101、XJa XJa (DE3) XJb, XJb号可以处理结构(DE3)和10 kb。

不需要结果当使用氨苄青霉素或羧苄青霉素的选择。然而,一个结果的步骤是必需的,当使用氯霉素,卡那霉素,四环素,因为抗生素本身的作用方式。

我们建议以下过程结果的步骤:
1。培养细胞在冰上的质粒后5 - 10分钟。
2。添加4卷的SOC媒体。
3所示。孵化在37°C与温柔颤抖60分钟200 - 300 rpm。
4所示。在预热传播文化板包含适当的抗生素。

我们不推荐稀释主管细胞。我们建议少用DNA转化细胞,或能整除的细胞在小卷转换。如果绝对必要,冷1 x主管缓冲区(混合&转换工具包,T3001 & T3002)应该用于稀释。

——准备新鲜的琼脂板上
——使用更多的抗生素在盘子
——培养板镀后较短的时间内细胞

热休克并不是必须的,但是有时它可以受益人在准备库或改变XJb自我分解大肠杆菌菌株。

我们建议以下协议与产物热休克:
1。培养细胞在冰上的质粒后5 - 10分钟。
2。培养细胞为45秒42°C。
3所示。加入450毫升SOC的细胞。
4所示。孵化在37°C与温柔颤抖60分钟200 - 300 rpm。
5。在预热传播文化板包含适当的抗生素。

是的

大多数克隆菌株将大坝+ / dcm +除非特别指出基因型。

1。解冻细胞冷冻保存,而不是室温。
2。培养细胞和DNA混合物在冰上,在室温下不。然而,不孵化时间1小时。
3所示。收到时确保细胞仍然冻结。
4所示。预热文化板块在37°C至少30分钟。
5。准备新鲜的磅琼脂板包含适当的抗生素。
6。准备一个新的DNA样本。
7所示。存储细胞在-80°C(不是4°C或-20°C)。如果冷冻断裂,细胞应该是好的,只要温度不高于-50°C。
8。避免冻结/解冻周期。

DH5α相当于Zymo 5α。DH10B,全球,一个全球相当于Zymo 10 b。对于XL-21蓝色,JM109是最接近的匹配和Stbl3 HB101是最接近的匹配。