为了获得最好的结果，在阿拉伯糖诱导前细胞不应活跃生长。这是通过使用隔夜发酵剂来实现的，如协议中所述，其中细胞已经处于固定生长阶段。如果需要使用较新鲜的发酵剂，可以在发酵剂培养物中加入阿拉伯糖。

用0.01% - 0.1% Triton X-100将细胞颗粒重悬于水中。对于his标签纯化，在His-spin Protein Miniprep试剂盒的His-Binding Buffer中重悬(Zymo Research产品# P2001或P2002)。酸性缓冲液和含有高浓度镁的缓冲液^{2 +}(> 1mm)，以及稳定细胞壁的相关金属，在不同程度上抑制裂解反应。如果可能的话，在细胞裂解后向缓冲液中加入镁。

根据所用材料的数量，裂解的材料可能会变得粘稠，阻碍有效的操作。然而，对于大多数应用来说，不需要使用大量的细胞材料。如有必要，剧烈涡旋30秒将在大多数情况下降低粘度。另外，可以使用核酸酶处理(如DNAse I)来降低粘度。用额外的缓冲液稀释细胞裂解液也将降低粘度问题。

不要在含有甘油的缓冲液中进行冻融循环。甘油可以保护大肠杆菌形成对细胞裂解至关重要的冰晶。

当葡萄糖被添加到生长培养基中时，当它存在于培养基中时，它会抑制自溶基因的诱导。随着细胞的生长，它们消耗葡萄糖作为碳源。一旦葡萄糖被消耗，自溶就开始了。

非λ溶菌酶通常能降解甲壳素。然而，在这些细胞中表达的λ溶菌酶不能降解甲壳素。λ溶菌酶是一种转糖基酶。

热冲击不是必需的，但是在制备库或转换XJb自溶时，有时它可以受益大肠杆菌菌株。

我们推荐以下方案的热休克与生长:
1.加入质粒后，将细胞置于冰中孵育5-10分钟。
2.在42°C下培养细胞45秒。
3.向细胞中加入450毫升SOC。
4.在37°C孵育60分钟，以200-300 rpm的速度轻轻摇动。
5.将其铺在装有适当抗生素的预热培养板上。

是的

DH5α相当于zyymo 5α。DH10B、Top10、One Shot Top10相当于Zymo 10B。对于XL-21 Blue, JM109是最接近的匹配，对于Stbl3, HB101是最接近的匹配。

-准备新鲜的琼脂板
-在培养皿中使用更多抗生素
-在电镀细胞后，缩短孵育时间

我们不建议稀释活性细胞。我们建议用更少的DNA来转化细胞，或者在转化前用更小的体积来混合细胞。如绝对必要，应在稀释中使用冷的1X有效缓冲液(Mix & Go转化试剂盒，T3001和T3002)。

当使用氨苄西林或卡本西林进行选择时，不需要生长。然而，当使用氯霉素、卡那霉素和四环素时，由于抗生素本身的作用方式，需要一个生长步骤。

对于outgrowth步骤，我们建议执行以下步骤:
1.加入质粒后，将细胞置于冰中孵育5-10分钟。
2.增加4卷SOC介质。
3.在37°C孵育60分钟，以200-300 rpm的速度轻轻摇动。
4.将其铺在装有适当抗生素的预热培养板上。

我们所有的活性细胞都被归类为生物安全1级，不是转基因生物。只有当它们与质粒转化时，它们才成为转基因生物。

确实没有推荐的最大或最小DNA浓度，但我们使用10 pg作为质量控制。但是，添加的DNA体积不应超过细胞总体积的5%;随着DNA使用量的增加，效率会降低几倍。如果DNA样本太稀释，使用我们的DNA清洁浓缩器。

1.在冰上解冻细胞，而不是在室温下。
2.在冰上培养细胞和DNA混合物，而不是在室温下。但是，孵育时间不要超过1小时。
3.确保细胞在接收时仍处于冷冻状态。
4.在37°C下预热培养板至少30分钟。
5.准备含有适当抗生素的新鲜LB琼脂板。
6.准备一个新的DNA样本。
7.将细胞保存在-80°C(不是4°C或-20°C)。如果冷冻室坏了，只要温度不超过-50°C，电池就没问题。
8.避免冻融循环。

除非基因型中特别注明，大多数克隆株为dam+/dcm+。

如果获得的结果不令人满意，在解冻(步骤5)后在更高的温度(25 - 37°C)或更长的时间(10或20分钟)下培养细胞可以显著改善裂解效果。

对于Zymo 5α和Zymo 10B高达20kb。然而，转换效率在10-20kb之间成比例地下降。超过20kb，细胞很难转化。JM109, HB101, XJa, XJa (DE3)， XJb, XJb (DE3)和TG1可以处理高达10kb的结构。