5-MC DNA ELISA套件

D5325 / D5326


5-MC DNA ELISA套件

猫 ＃ 姓名 尺寸 价格 数量
D5325 5-MC DNA ELISA套件 1 x 96准备 $ 423.00
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D5326 5-MC DNA ELISA套件 2 x 96 rxns。 $ 672.00
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文件

5-MC DNA ELISA套件

强调
  • 用于DNA全球5-甲基胞嘧啶（5-MC）的高通量检测
  • 流线型工作流程可以在不到3小时内完成
描述

5-MC DNA ELISA试剂盒允许研究人员在不到3小时的任何DNA样品中准确定量5-MC。该试剂盒具有抗5-甲基胞嘧啶单克隆抗体，其既敏感且特异于5-MC。该测定与来自脊椎动物，植物和微生物源以及甲基化的PCR扩增子和碎片DNA的各种输入DNA兼容。DNA样品中的5-MC百分比可以从用包括在套件中包括的专门设计的控制器产生的标准曲线中精确地量化。此外，快速流线型的工作流程是高通量分析的理想选择。

检测 >每100 ng DNA 0.5％5-mc
设备 孵化器和ELISA板读数器。建议使用多通道移液器。可用于阻塞和洗涤步骤的自动平板垫圈。
输入 该协议针对100ng输入DNA /井进行了优化。与10-200ng /孔的DNA相容。
样本来源 纯化的基因组DNA，质粒DNA，PCR扩增产物或水中的DNA片段，TRIS-EDTA或类似物。德赢vwin体育官方网址
Q1：为什么添加HRP开发人员后没有颜色开发？

确保使用正确的缓冲器涂覆，块并清洗板。确认HRP显影剂和次级抗体正确储存并正确制备。

Q2：如何量化DNA样品中5-MC的百分比？

1.使用对数曲线Y = Ln（x）+ b的控制DNA的吸光度产生标准曲线。
2.使用标准曲线方程计算每个样品的％5-MC。为了解决方程，使用e（y-b​​ / m）确定x（％5-mc）的值。
3.为了确定样品的CpG甲基化（％5MC / CpG位点）（取决于样品来源），将观察到的ODS从标准曲线乘以大肠杆菌（控制DNA来自大肠杆菌）之间的折叠差异，以及您的目标基因组（见下表）。您可以在此处停止并将您的数据报告为％CPG甲基化。
4.通过将计算的％CpG甲基化乘以总胞嘧啶/基因组长度来计算全局甲基化（％5MC /总胞嘧啶）。

  • 大肠杆菌
    • 总基因组[BP]：4.639.675
    • CPG网站：346.670
    • 总胞嘧啶：1.179.554
    • CpG /基因组长度（CPG密度）：0,07472
    • 折叠差异CPG密度（ECOLI / OOI）：1,000
    • 胞嘧啶/基因组长度：0,254
  • 老鼠
    • 总基因组[BP]：2.654.​​895.218
    • CPG网站：21.342.492
    • 总胞嘧啶：534.142.064
    • CPG /基因组长度（CPG密度）：0,00804
    • 折叠差异CPG密度（ECOLI / OOI）：9,295
    • 胞嘧啶/基因组长度：0,201
  • 土豆
    • 总基因组[BP]：705.934.411
    • CPG网站：10.823.234
    • 总胞嘧啶：115.562.590
    • CPG /基因组长度（CPG密度）：0,01533
    • 折叠差异CPG密度（ECOLI / OOI）：4,873
    • 胞嘧啶/基因组长度：0,164
  • 人类HG19
    • 总基因组[BP]：3.137.161.264
    • CPG网站：28.700.086
    • 全胞嘧啶总数：585.012.752
    • CPG /基因组长度（CPG密度）：0,00915
    • 折叠差异CPG密度（ECOLI / OOI）：8,167
    • 胞嘧啶/基因组长度：0,186
  • 大鼠RN4.
    • 总基因组[BP]：2.834.127.293
    • CPG网站：24.799.282
    • 总胞嘧啶：572.296.669
    • CPG /基因组长度（CPG密度）：0,00875
    • 折叠差异CPG密度（ECOLI / OOI）：8,539
    • 胞嘧啶/基因组长度：0,202
  • 斑马鱼达内尔7.
    • 总基因组[BP]：1.412.464.843
    • CPG网站：25.251.167
    • 总胞嘧啶：258.711.448
    • CPG /基因组长度（CPG密度）：0,01788
    • 折叠差异CPG密度（ECOLI / OOI）：4,180
    • 胞嘧啶/基因组长度：0,183
  • 猪
    • 总基因组[BP]：2.808.525.991
    • CPG网站：30.460.512
    • 总胞嘧啶：525.183.245
    • CPG /基因组长度（CPG密度）：0,01085
    • 折叠差异CPG密度（ECOLI / OOI）：6,889
    • 胞嘧啶/基因组长度：0,187
  • 兔子
    • 总基因组[BP]：2.737.490.501
    • CPG网站：36.000.387
    • 全胞质总核酸：569.377.656
    • CPG /基因组长度（CPG密度）：0,01315
    • 折叠差异CPG密度（ECOLI / OOI）：5,682
    • 胞嘧啶/基因组长度：0,208

例子：
从创建的标准曲线，计算％5MC的鼠标样本为2.5％。
确定％5MC / CPG站点：通过CPG /基因组长度的折叠差异倍增％5MC（参见表，有机体小鼠）= 2.5×9.3 = 23.25％CPG甲基化。
确定（％5MC /总胞嘧啶=全局甲基化）：将计算的％5MC / CPG乘以0.201 = 4.67％全球5MC。

Q3：可以控制DNA被调整为低％5-MC样本吗？

是的，可以调节控制DNA以测定为低5-mc百分比（即0,2.5,5,2.5,10％等）。套件可以准确地检测5-MC至0.5％。我们建议您包括0％标准，其中测量的O.D.代表背景吸光度。如果样品的吸光度高于0％对照，则可以从标准曲线外推出％5MC。

Q4：如何存储5-MC ELISA试剂盒的组件？

组件将以蓝冰和干冰运送。到达时，请务必在-20°C下将缓冲剂存放在4°C，控制DNA和抗5-MC抗体。二次抗体可以在4℃下储存1周;对于长期储存制备小等分试样并保持在-20°C。

Q5：ELISA套件的保质期是什么？

从购买之日起，我们保证了套件组件的完整性长达6个月。

Q6：ELISA试剂盒是否在非CPG上下文中检测甲基化胞嘧啶？

是的，试剂盒可以在任何情况下检测甲基化胞嘧啶，抗体不是特异性的序列。

Q7：哪个波长应该用于ELISA？

最佳吸光度为405nm，但405-450 nm也将工作。

Q8：每孔的DNA的最小输入量是多少？

该试剂盒优化为100 ng /井，但您可以使用降至25 ng /井。应以与标准相同的浓度测定样品DNA。

猫 ＃ 姓名 尺寸 价格
D5325-1-15 5-MC涂层缓冲液 15毫升 $ 29.00
D5325-1-30 5-MC涂层缓冲液 30毫升 46.00美元
D5325-3-15 二次抗体 15μl. $ 29.00
d5325-3-30. 二次抗体 30μl. 46.00美元
D5325-2-250 5-MC ELISA缓冲器 250毫升 $ 89.00
D5325-5-1 负面控制 50μl（100ng /μl） 111.00美元
D5325-5-2 积极的控制 50μl（100ng /μl） $ 131.00
D5425-4-15 HRP开发人员 15毫升 $ 12.00
d5425-4-30. HRP开发人员 30毫升 $ 21.00
A3001-30.
A3002-15 抗5-甲基胞嘧啶单克隆抗体（克隆7d21） 15μl. $ 53.00
C2020 96孔elisa板 12 x 8井条 $ 67.00
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