我们的研究发现，即使没有诱导物(如IPTG)，使用常见的Luria Broth (LB)培养基也能产生相对较高的重组蛋白表达背景水平。在添加诱导剂后，表达量往往增加得不够。我们的结论是，虽然LB是一种很好的正常培养基大肠杆菌操作，在细胞扩张过程中，它不是抑制蛋白表达的良好介质，在添加诱导剂时，它也不是理想的蛋白表达介质。EB™和OB™旨在克服这些问题。EB™设计用于在细胞扩增过程中通过调节环AMP (cAMP)和cAMP受体蛋白(CRP)的水平来抑制重组蛋白的表达，这样细胞就可以在不受不希望的外源蛋白表达压力的情况下进行扩增，也不会意外选择突变克隆来过度生长原始接种。当细胞扩增时，加入OB™培养基进行蛋白表达。在这个过程中，不需要进一步的细胞生长，新的突变体的选择也不再发生，因为在这个阶段细胞复制非常有限。精心配制的OB™成分通过调节cAMP和CRP水平起类似作用，但与EB™作用相反。因此，对于T7等强启动子，不需要添加IPTG。

我们的生长培养基只含有标准的常用成分，盐和碳水化合物。最终的成分和个别成分的比例已经过精心优化，以产生上述代谢效应。

当表达的蛋白稳定且不干扰细胞生长时，EB™可被LB替代。OB™不可替代。

可以使用简化的方案，但只能用于最稳定和容易表达的蛋白质。你可以简单地从步骤2开始。这将导致强蛋白质过表达，并有引入不想要的突变或其他不想要的影响的风险。

IPTG诱导T7启动子过强。OB™中生长引起的代谢效应也很强。这是一个强大的组合，总是导致过快的蛋白质表达，对细胞活力产生负面影响。这种情况导致重组蛋白产量降低，并可能导致额外的质粒/蛋白不稳定。