我们所有的活性细胞都被分类为生物安全级别1，并不是转基因生物。只有用质粒转化后，它们才成为转基因生物。

大多数克隆菌株将是dam+/dcm+，除非在基因型中特别注明。

是的

DH5α相当于Zymo 5α。DH10B、Top10和One Shot Top10相当于Zymo 10B。对于XL-21 Blue, JM109是最接近的匹配，对于Stbl3, HB101是最接近的匹配。

-制备新鲜琼脂平板-在平板中多使用抗生素-在细胞镀液后缩短孵育时间

我们不建议稀释感受态细胞。我们建议使用更少的DNA来转化细胞，或在转化前用更小的体积对细胞进行混合。如果绝对有必要，应在稀释中使用冷的1X合格缓冲液(Mix & Go转化试剂盒，T3001和T3002)。

当使用氨苄西林或卡苄西林进行选择时，不需要生长。然而，当使用氯霉素、卡那霉素和四环素时，由于抗生素本身的作用模式，需要一个生长步骤。我们建议对outgrowth步骤执行以下步骤:加入质粒后，将细胞置于冰上孵育5-10分钟。2.增加4卷SOC介质。3.在37°C孵育60分钟，轻轻摇动200-300 rpm。4.涂抹在预热过的含有适当抗生素的培养盘上。

Zymo 5α和Zymo 10B高达20kb。然而，转换效率在10-20kb之间成比例下降。在20kb以上，细胞很难转化。JM109, HB101, XJa, XJa (DE3)， XJb, XJb (DE3)和TG1可以处理高达10kb的结构。

确实没有建议的最大或最小DNA浓度，但我们用10 pg来进行质量控制。但是，加入的DNA体积不应超过细胞总体积的5%;当使用的DNA体积增加时，效率会下降几倍。如果DNA样本太稀释，使用我们的DNA清洁和浓缩器。

1.解冻细胞在冰上，而不是室温。2.在冰上培养细胞和DNA混合物，而不是室温。但是，孵育时间不要超过1小时。3.确保细胞在接收时仍处于冷冻状态。4.在37°C预热培养板至少30分钟。5. Prepare fresh LB agar plates containing the appropriate antibiotic. 6. Prepare a new DNA sample. 7. Store the cells at -80°C (not 4°C or -20°C). If the freezer breaks, the cells should be OK as long as the temp does not go higher than -50°C. 8. Avoid freeze/thaw cycles.

热休克不是必要的，但是在准备库或转化XJb自溶时，热休克有时是有益的大肠杆菌菌株。我们推荐以下方案为热休克与生长:加入质粒后，将细胞置于冰上孵育5-10分钟。2.42°C孵育细胞45秒。3.向细胞中加入450毫升的SOC。4.在37°C孵育60分钟，轻轻摇动200-300 rpm。5. Spread on a pre-warmed culture plate containing the appropriate antibiotic.