该试剂盒被优化用于K12和B衍生菌株。一些常用的菌株包括，TOP10, ccdB survival, XL1 Blue和Stbl3。(https://blog.addgene.org/save-time-and-money-by-making-your-own-competent-cells)如果使用野生型菌株，这些菌株通常转化效率较低。因此，我们建议尝试一下提高转换效率的技巧。

在37°C摇晃的LB中准备过夜培养。-如果从已经具有活性或电活性的细胞开始，将1-5 ul细胞添加到5ml LB中，在37°C下摇匀过夜。-如果从新鲜菌落开始，用单个菌落接种5ml LB，在37°C下摇匀过夜。

细胞可以在1X洗涤缓冲液中重新悬浮，并在冰上放置长达1个半小时，而转化效率不会显著降低。

细胞可以在1X Competent Buffer中重新悬浮，并在冰上放置长达1个半小时，而转化效率不会显著降低。

1.用ZymoBroth代替SOB。2.在较低的温度(18-30°C，实际原因为25-26°C)下在ZymoBroth中扩展培养。较高的温度(即33-37℃)会使转化效率降低2 - 10倍。3.细胞应在log早期到log中期收获(OD600nm 0.4 - 0.6)。不要培养超过0.6 OD600nm的细胞，因为当细胞达到对数后期或固定阶段时，它们的能力会下降。4.一旦细胞的外径达到0.4到0.6之间，并将其放置在冰上，确保在细胞制备的所有步骤中所有东西都是冰冷的。 5. Cool down the centrifuge to 0-4°C before use. 6. Cool down the following items at -20°C prior to use: - Sterile filter pipette tips - Sterile centrifuge bottles or conical tubes to be used for pelleting the cells. - Sterile microcentrifuge tubes to be used for aliquoting (can also be cooled down at -70°C prior to use) - A microcentrifuge tube rack (can also be cooled down at -70°C prior to use) 7. When resuspending the cells: - Do not remove the cells from the ice for too long - Make sure the tubes are in contact with the ice while resuspending - Only remove the cells from the ice for a couple of seconds to check on the progress. 8. Perform a Heat Shock/Outgrowth Procedure using the following protocol: 1. Incubate cells on ice for 5-10 min after addition of plasmid. 2. Incubate cells at 42°C for 45 seconds. 3. Add 450 ml of SOC to the cells. 4. Incubate at 37°C for 60 min with gentle shaking at 200-300 rpm. 5. Spread on a pre-warmed culture plate containing the appropriate antibiotic.

是的，缓冲液非常稳定，可以在室温下储存几个月。将您的工具包放入冰箱(4°C)，以便更长的存储时间。在处理收获的细胞之前，请确保试剂是冰冷的。

1.在你希望进行的转化反应的体积中对细胞进行调整，以尽量减少操作的次数。反复的冻结/解冻循环会造成一些性能损失。2.将冷却的微离心管架放在冰(或干冰)上，用预冷却的微离心管架填满，将细胞对齐，盖上管盖。一旦你完成，转移管到-80°C以后使用。在液氮中快速冻结是不必要的。

液氮只用于在储存前快速冷冻细胞。最常见的储存方法是在冰箱中保持在-70°C以下。

转化效率取决于几个因素，包括菌株、生长条件(例如生长介质、温度、曝气、收获时的细胞密度)、质粒(例如大小、复制的起源、抗性标记)和与质粒的孵育时间。因此，效率无法保证。